La calidad hace la diferencia

Actualmente la precisión y sensibilidad de un reactivo en las pruebas para determinación y cuantificación de endotoxinas son esenciales para disminuir las tasas de repetición y poder mejorar los tiempos de respuesta en función a la seguridad e integridad de los productos elaborados. Los reactivos de Charles River han sido caracterizados por ser robustos y consistentes en la obtención de resultados. Por lo anterior en este blog vamos a profundizar en el comportamiento del reactivo KCA de Charles River en comparación con los reactivos cinéticos y cromogénicos de la competencia.

Metodología del estudio.

Para realizar el ensayo se realizó una curva con una endotoxina estándar de referencia tomando una solución stock de 20 UE/mL y se llevaron a 6 puntos de diferentes concentraciones (5, 0.5, 0.005, 0.001 y 0.0005 UE/mL). Cada punto de la curva fue dispensado en los pozos de la microplaca por triplicado. En cuanto a los reactivos de LAL tanto el de Charles River como los reactivos de la competencia fueron reconstituidos de acuerdo con las recomendaciones de los fabricantes con el fin de preservar la integridad del reactivo en la realización de las pruebas. Tanto las muestras con el reactivo de la competencia como con el reactivo de Charles River fueron depositadas en la misma placa la cual fue incubada en un lector de placas Biotek ELx8081U a una temperatura de 37°C, a una longitud de onda de 405 nm y leído en intervalos de 30 segundos por 5,400 segundos.

Resultados obtenidos y conclusión

En cuanto a los resultados obtenidos se puede observar como en los reactivos cinéticos de la competencia se observa en las gráficas poca o nula diferenciación entre los puntos más bajos de la curva, específicamente los resultados de los puntos 0.0005 y 0.001 UE/mL no presenta separación en cuento a los tiempos de reacción y si se realiza la comparación en función de la resolución se puede observar que esta básicamente no existe en comparación con los controles negativos y los dos últimos puntos de la curva.

Si se quiere determinar de una forma más exacta podemos observar que los resultados obtenidos con el reactivo de Charles River tienden a ser más robustos en el sentido que tienen la capacidad de separar perfectamente concentraciones pequeñas de endotoxinas y además tener una resolución en las gráficas que permite diferenciar valores pequeños con el control negativo, permitiendo obtener un valor mucho más certero y verídico si nuestra muestra tiene una carga cercana a estos valores bajos de endotoxinas. En cuanto a la determinación de linealidad de las curvas se pueden extraer claramente los dos valores de R en los cuales para el reactivo de la competencia fue de R=9903 evidenciando un comportamiento más variable al comienzo de la curva; Para los reactivos de Charles River se obtuvo un valor de R=0.9989 y se puede apreciar como en comparación con el reactivo de la competencia se conserva mejor la linealidad y determinación de valores pequeños.